基于PiggyBac转座系统构建稳定表达ABEmax基因的HEK293T细胞系
1. 国家卫生健康委科学技术研究所（北京，100081）；2. 国家人类遗传资源中心
Construction of HEK293T cell line stably expressing ABEmax gene based on PiggyBac transposition system
1. National Research Institute for Family Planning, Beijing, 100081；2. National Human Genetic Resources Center, Beijing, 102206
摘要 使用PiggyBac（PB）转座系统在HEK293T细胞中敲入腺嘌呤碱基编辑工具ABEmax基因，构建稳定表达ABEmax基因的工具细胞系。方法：根据PB转座原理，将ABEmax基因和抗生素筛选基因以同源重组的方法插入到PB质粒内，构建pPB-ABEmax真核重组表达质粒。将重组质粒和辅助质粒共同转染至HEK293T细胞中，利用嘌呤霉素抗性筛选细胞，流式细胞仪分选单克隆细胞。单细胞扩增培养后，利用PCR鉴定ABEmax基因的插入水平，RT-qPCR鉴定ABEmax的表达水平以及利用sgRNA测试工具细胞的编辑水平。结果：成功构建pPB-ABEmax真核重组表达质粒，筛选出特异性插入ABEmax基因的HEK293T细胞系，HEK293T-ABEmax的基因编辑效率与HEK293T细胞转染Test-sgRNA与ABEmax的对照组无统计学差别（P＞0.05）。结论：利用PiggyBac基因编辑技术成功构建并获得了腺嘌呤碱基编辑工具ABEmax基因稳定表达细胞系。
关键词 ：
PiggyBac转座系统 ,
碱基编辑 ,
ABEmax ,
细胞系
引用本文:
张 璐1,2 安莉莎1,2 金孝华1,2 马 旭1,2*. 基于PiggyBac转座系统构建稳定表达ABEmax基因的HEK293T细胞系[J]. 中国计划生育学杂志, 2022, 30(7): 1472-.
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